Resistencia de Aedes aegypti (diptera: culicidae) a insecticidas organofosforados y piretroides en la localidad de Orotina, Alajuela, Costa Rica / Resistance of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae to organophosphate and pyrethroid insecticides in Orotina, Alajuela, Costa Rica

Objetivos: Determinar la resistencia de una cepa de Aedes. aegypti de Orotina a insecticidas organofosforados (temefós y malatión), y a piretroides (deltametrina, lambda cialotrina y cipermetrina). Métodos: La evaluación de la resistencia se efectuó mediante bioensayos larvarios. A partir de cada uno de los insecticidas se calculó la concentración letal 50% (CL50). También se calculó el factor de resistencia 50% (FR50) con respecto a la cepa Rockefeller, que sirvió como control susceptible. En casos de resistencia, la evaluación se repitió exponiendo previamente las larvas a butóxido de piperonilo (BP), S, S, S tributilfosforotritionato (DEF) y ácido etacrínico (AE) para establecer los mecanismos de detoxificación asociados con la resistencia. En cada caso se calculó un factor de sinergismo 50% (FS50). Resultados: La cepa Orotina mostró susceptibilidad a temefós, malatión, deltametrina y lambda cialotrina, pero mostró resistencia incipiente a cipermetrina (CL50= 0,01103 mg/L, FR50 = 5,32). Sólo el BP revertió la resistencia a este insecticida (FS50 =10,92), lo que representa un mecanismo de detoxificación asociado con el sistema citrocromo P450 monooxigenasa. Discusión: Aunque la cepa de Ae. aegyptide Orotina mostró resistencia a cipermetrina, existen otros insecticidas para los cuales fue susceptible, que brindan opciones a las autoridades de salud para su implementación en el control químico del vector. Conclusiones: El monitoreo de la resistencia es requerido para asegurar la efectividad de los insecticidas que se utilizan en el control químico.

Abstract Objectives: To determine the resistance to organophosphate (temephos and malathion) and pyrethroid (deltamethrin, lambda cyhalothrin, and cypermethrin) insecticides in a strain of Aedes aegypti from Orotina. Methods: The evaluation of the resistance was carried out by larval bioassays. Lethal concentration 50% (LC50) was calculated for each insecticide. A factor of resistance 50% (FR50) was also calculated with respect to the Rockefeller strain, which served as susceptible control. In cases of resistance, the evaluation was replicated by exposing the larvae to piperonyl butoxide (PB), S, S, S tributylphosphorotritionate (DEF), and ethacrynic acid (AE), in order to establish the detoxification mechanisms associated with the resistance. In these cases, a factor of synergism 50% (FS50) was also calculated. Results: The Orotina strain of Ae. aegyptiwas susceptible to temephos, malathion, deltamethrin and lambda cyhalothrin, but showed incipient resistance to cypermethrin (LC50 = 0.01103 mg/L, FR50 = 5.32). Only PB reversed the state of resistance (FS50 = 10.92), which suggests a detoxification mechanism associated with the citochrome P450 monooxygenase system. Discussion: Although the Ae. aegyptistrain from Orotina showed resistance to cypermethrin, it was susceptible to other insecticides, which can be used as alternative options for chemical control of the vector. Conclusions: Monitoring of resistance is required to ensure the effectiveness of insecticides used in chemical control.

Dengue virus infection induces chromatin remodeling at locus AAEL006536 in the midgut of Aedes aegypti / La infección por virus dengue induce remodelación de la cromatina en el locus AAEL006536 en el intestino medio de Aedes aegypti

Abstract: Objective: To identify and characterize Aedes aegypti's AAEL006536 gene proximal upstream cis-regulatory sequences activated by dengue virus infection. Materials and methods: A. aegypti Rockefeller strain mosquitoes were blood fed or infected with dengue virus 2. Open chromatin profiling was then carried out in pools of midguts from each group of mosquitoes. Results: The proximal upstream region does not contain open chromatin sites in the midguts of blood-fed mosquitoes as detected by FAIRE-qPCR. In contrast, two cis-regulatory sites were identified in the same upstream region of dengue virus-infected mosquito midguts. The distal sequence contains STAT-, REL- and C/EBP-type transcription factor binding sites. Conclusion: The activation of two proximal cis-regulatory sequences, induced by dengue virus infection, is mediated by chromatin remodeling mechanisms. Binding sites suggest a dengue virus infection-induced participation of immunity transcription factors in the up-regulation of this gene. This suggests the participation of the AAEL006536 gene in the mosquito's antiviral innate immune response.

Resumen: Objetivo: Identificar y caracterizar las secuencias reguladoras activadas por la infección por virus dengue en la región proximal del gen AAEL006536 de Aedes aegypti. Material y métodos: Mosquitos de la cepa Rockefeller de A. aegypti se infectaron con virus dengue o se alimentaron con sangre. Se obtuvieron los perfiles de cromatina abierta del locus en los intestinos de cada uno de los grupos. Resultados: Se identificaron dos sitios reguladores solo en los intestinos de mosquitos infectados por virus dengue. El sitio distal contiene sitios de unión a factores de transcripción tipo REL, STAT y C/EBP. Conclusiones: La activación de dos sitios reguladores proximales está mediada por la remodelación de la cromatina. Los sitios de unión a factores de transcripción en el sitio regulador distal sugieren la participación de las vías de inmunidad en la regulación del gen. Esto sugiere la participación de este gen en la respuesta inmune del mosquito frente a la infección viral.

Tecnologias integradas para controle biológico, mecânico e genético de Aedes aegypti / Integrated technologies for biological, mechanical and genetic control of Aedes aegypti

Duas tecnologias alternativas para o controle de Aedes aegypti foram avaliadas: a aplicação espacial de larvicida biológico-Bti em potenciais criadouros peridomiciliares, e a liberação de machos estéreis para inviabilização reprodutiva das fêmeas do mosquito. As ações foram realizadas pelos Agentes dos Serviços de Saúde em 15 vilas da Ilha de Fernando de Noronha, e em uma área (900 imóveis) no bairro da Várzea/Recife/Pernambuco. A efetividade dos métodos foi avaliada por indicadores entomológicos,estimados pela presença, quantidade e viabilidade de ovos do mosquito, coletados em armadilhas, e por marcadores genéticos. A aplicação de Bti, com atomizador costal, ocorreu a cada 30 dias em ambas as áreas. Uma redução importante e sustentável da população de A. aegypti,por este método, foi alcançada em 2015/2016 na Várzea e, em 2016, na Ilha, onde a remoção de 18 toneladas de resíduos sólidos em 2015 contribuiu possivelmente para os resultados. Machos esterilizados com radiação gama foram produzidos em massa no laboratório e liberados em uma das vilas da Ilha. A análise espaço-temporal dos indicadores, de dez/2015a ago/2016, revelou redução expressiva da densidade populacional do mosquito e da diversidade genética da população local. Ambas as abordagens parecem ter reduzido o contato homem-vetor e os riscos de transmissão de arboviroses na Ilha, apesar da elevada competência vetorial da população local do mosquito para os vírus Zika e Dengue. Os métodos testados se mostraram eficientes e passíveis de serem integradas às ações do SUS voltadas ao controle de A. aegypti.

Two alternative technologies were evaluated for Aedes aegypti control:the spraying of a biological larvicide (Bti) in potential peridomiciliarybreeding sites and the release of sterile males to promote reproductionblockage in wild females. Actions were carried out by Agents of theHealth Services, in 15 villages of the Fernando de Noronha Island and in 900 properties from the district of Várzea, Recife-PE. The effectiveness of both methods was evaluated by entomological indicators, estimatedby the presence, quantity and viability of eggs from the mosquito collectedin traps and through genetic markers. Bti was delivered by backpacksprayer every 30 days in both areas. A significant and sustainablereduction of the A. aegypti population as a result of this technique wasachieved in 2015/2016 in Várzea and in 2016 in the Island, where it wasstrengthened by the removal of 18 tons of solid waste in 2015. Malessterilized with gamma radiation were mass-produced in the laboratoryand released in one village of the Island. The spatiotemporal analysis ofthe indicators, from Dec/2015 to Aug/2016, revealed a significant reductionin mosquito density, which impacted on the genetic diversity of thelocal population. Both approaches seem to have reduced human-vectorcontact and the risk of arbovirus transmission in the Island, althoughlocal mosquito population presented high vector competence to Zikaand Dengue virus. These methods were efficient and could be integratedinto SUS actions directed to A. aegypti control.

Perfil de resistencia a insecticidas en una cepa de Aedes aegypti (Linnaeus) de la región Caribe de Costa Rica / Insecticidal resistance profiles of an Aedes aegypti (Linnaeus) strain from the Caribbean Region of Costa Rica

Introducción: el dengue constituye la principal enfermedad de transmisión vectorial en Costa Rica. El control del vector Aedes aegypti consiste en la aplicación de piretrinas y temefós, por lo cual es importante monitorear la aparición de resistencia a estos insecticidas. Materiales y métodos: se efectuaron bioensayos con larvas de Ae. aegypti procedentes del cantón de Guácimo en la Región Caribe de Costa Rica. Grupos de 20 larvas fueron expuestos por 24 horas a concentraciones de insecticidas que provocaran una mortalidad entre el 2 y el 100 por ciento. Las pruebas fueron efectuadas por quintuplicado y se calculó la concentración letal 50 por ciento (CL50). Como control susceptible se empleó la cepa Rockefeller. Un radio de resistencia 50 por ciento (RR50) fue calculado para cada insecticida. En caso de resistencia se repitieron los ensayos exponiendo las larvas a butóxido de piperonilo (PB) y S, S, S, tributilfosforotritioato (DEF) para perfilar el mecanismo enzimático vinculado con dicha resistencia. Resultados: no se observó resistencia a temefós y deltametrina, pero sí se encontró resistencia incipiente a la cipermetrina (CL50 = 0,00845 mg/L, rango: 0,00664-0,01038, RR50 = 6,07). El análisis con sinergistas determinó un radio de singergismo (RS) de 19,2 para el PB y de 0,9 para DEF. Discusión: los resultados demuestran que existe un proceso de desarrollo de resistencia a la cipermetrina en los mosquitos Ae. aegypti en esta localidad, el cual está relacionada con la actividad citocromo P450 monooxigenasa. Esto alerta a las autoridades para sustituir dicho insecticida y así asegurar el adecuado control del vector sin la generación de resistencia(AU)

Introduction: dengue is the main vector-borne disease in Costa Rica. The control of the vector Aedes aegypti covers the application of pyrethrins and temephos. For this reason, it is important to monitor the development of resistance to these insecticides. Material and Methods: bioassays were performed using Ae .aegypti larvae from the county of Guacimo in the Caribbean region of Costa Rica. Twenty-larvae groups were exposed to insecticidadl concentrations for 24 hours, which would generate 2 to 100 percent mortality. The tests were performed five times, and a 50 percent lethal concentration (LC50) was calculated. The Rockefeller strain was used as susceptibility control. A 50 percent resistance ratio (RR50) was calculated for each insecticide. When resistance occurred, tests were repeated by exposing the larvae to piperonyl butoxide (PB) and S, S, S, tributylphosphorotrithioate (DEF) in order to determine the enzymatic mechanism associated with this resistance. Results: no resistance to temephos or deltamethrin was observed, but emerging resistance to cypermethrin was detected (LC50 = 0.00845 mg/L, range from 0.00664 to 0.01038, RR50 = 6.07). The synergistic analysis determined a synergism ratio (SR) of 19.2 for PB and 0.9 for DEF. Conclusions: these results show that there is a process of developing resistance to cypermethrin in Ae. aegypti mosquitoes of this county, which is associated with cytochrome P450 monooxygenase activity. This alerts authorities to the need of replacing this insecticide and ensure the appropriate vector control without generating resistance(AU)

Fiebre Chikungunya / Chikungunya fever

Antecedentes: La fiebre Chikungunya es causada por un alfavirus (CHIKV) ARN pertene- ciente a la familia Togaviridae. Fue descrito en 1953, a partir de entonces se han presentado epidemias desde África, Asia y últimamente casos en las Antillas en América. Ante el riesgo de importación y transmisión del virus, esta entidad ha adquirido importancia, antes poco conocida en nuestro continente. La presente revisión bibliográfica tiene como objetivo la actualización de conocimientos acerca de la fiebre Chikungunya. El CHIKV es transmitido por dos vectores, Aedes aegypti y albopictus, los humanos son el reservorio principal en los periodos epidémicos. Después de 3 a 7 días de incubación, aparece la fiebre, artralgias, cefalea. Laboratorialmente, se observa trombocitope- nia leve, leucopenia con linfopenia. Los indivi- duos no infectados previamente están en riesgo de adquirir la infección y desarrollar la enfermedad, siendo los neonatos y los ancianos más propensos a desarrollar formas más graves. La transmisión de madre a hijo es frecuente en la viremia materna intraparto, y conduce a la infección. La mortalidad es baja, pero la artral- gia inflamatoria con artropatía/artritis destruc- tiva puede comprometer la calidad de vida del paciente afectado. Dada la introducción del CHIKV en la Región, la detección oportuna, una respuesta apropiada y rápida, son necesarias para minimizar el riesgo de importación y transmisión del CHIKV...(AU)

Caracterização da resposta imunológica de Aedes aegypti e Culex quinquefasciatus à infecção pelo sorotipo 1 do Dengue vírus / Characterization of immune response of Aedes aegypti and Culex quinquefasciatus to infection by Dengue virus serotype 1

Os insetos podem atuar como pragas agrícolas e vetores de patógenos causadores de doenças ao homem e outros animais. Investigações a respeito do sistema imunológico de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus poderão contribuir para o desenvolvimento de métodos de controle das doenças veiculadas por estes insetos, principalmente a dengue, enfermidade causadora de sério problema de saúde pública no mundo. Apesar de Ae. aegypti ser a única espécie vetora confirmada na transmissão do vírus Dengue no Brasil, considera-se também importante um melhor entendimento dos mecanismos imunológicos de Cx. quinquefasciatus tido como refratário ao vírus. Neste estudo foram utilizadas linhagens de Ae. aegypti e Cx. quinquefasciatus mantidas no Insetário do Departamento de Entomologia do CPqAM/FIOCRUZ. Três grupos experimentais de fêmeas com 10 dias de idade foram formados para cada espécie. Grupo I, composto por fêmeas alimentadas com solução sacarose (10 por cento); grupo II, fêmeas alimentadas com sangue limpo e grupo III, fêmeas alimentadas com sangue infectado com o sorotipo DENV-1. De cada grupo foram obtidos hemolinfa, glândula salivar, intestino médio e corpo gorduroso para avaliação da expressão dos antimicrobianos defensina e transferrina. Essa avaliação foi realizada através de PCR em Tempo Real utilizando o kit QuantiFast SYBR Green - One-Step qRT-PCR. A avaliação da hemodinâmica foi realizada utilizando 10 microlitros de hemolinfa de cada grupo, através da contagem das células em câmara de Neubauer...

Actividad incrementada de las enzimas citocromo P450 monooxigenasas en cepas cubanas de Aedes aegypti de referencia, resistentes a insecticidas / Increased activity of cytochrome P450 monooxygenase enzymes in reference insecticide-resistant Aedes aegypti strains from Cuba

Introducción: las enzimas desintoxicadoras citocromo P450 monooxigenasas (MFO) constituyen uno de los principales mecanismos de resistencia de Aedes aegypti a insecticidas. En Cuba, aunque la presencia de estas enzimas se ha estudiado in vivo mediante el uso de sinergistas, su actividad no se ha determinado cuantitativamente in vitro, elemento que resulta imprescindible para abordar estudios de resistencia metabólica en los insectos. Objetivo: estandarizar un método para detectar la actividad de las citocromo P450 monooxigenasas in vitro, y determinarla entonces, en larvas y adultos de cepas de referencia de Aedes aegypti. Métodos: se utilizaron 3 cepas de laboratorio de Aedes aegypti seleccionadas por 14 o 15 generaciones con temefos, deltametrina o propoxur, respectivamente, y una cepa susceptible a los insecticidas. Resultados: se establecieron las condiciones para los ensayos de actividad enzimática (concentración de proteínas y de sustrato, 0,4 mg/mL y 12 mmol/L, respectivamente; y tiempo de reacción de 10 min). Hubo un incremento significativo de la actividad de las citocromo P450 monooxigenasas en las cepas resistentes, con una mayor frecuencia fenotípica de este carácter en el estadio larva. Conclusiones: las modificaciones a la técnica para la determinación de la actividad enzimática permitieron discriminar entre mosquitos de cepas susceptibles y resistentes en los estadios larva y adulto, por lo que se cuenta con otra herramienta para la detección de la resistencia metabólica en Cuba

Introduction: cytochrome P450 monooxygenase detoxifying enzymes (MFO) are one of the main resistance mechanisms of Aedes aegypti to insecticides. In vivo studies of the presence of these enzymes have been conducted in Cuba with the use of synergists. However, their activity has not been quantitatively determined in vitro, an indispensable step in studies about metabolic resistance in insects. Objective: standardize a method to detect the activity of cytochrome P450 monooxygenase in vitro, and then determine such activity in larvae and adults of Aedes aegypti reference strains. Methods: the study was based on three laboratory strains of Aedes aegypti selected for 14 or 15 generations with temephos, deltamethrin or propoxur, respectively, and a strain susceptible to insecticides. Results: the conditions for enzyme activity assays were established (protein and substrate concentration: 0.4 mg/mL and 12 mmol/L, respectively, and reaction time: 10 min). There was a significant increase in cytochrome P450 monooxygenase activity in resistant strains, with a higher phenotypic frequency in the larval stage. Conclusions: modifications to the technique used for determination of enzymatic activity made it possible to distinguish between mosquitoes from susceptible and resistant strains in larval and adult stages, providing a new tool for the detection of metabolic resistance in Cuba

Dípteros da Sub-família Phlebotominae: padronização da técnica imunoenzimática (ELISA) para detecção de fontes alimentares sanguíneas / Díptera of sub-family Phlebotominae standardization of Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for detection of blood feeding sources

O estudo do sangue ingerido pelos insetos tem evidentes significados ecológico e epidemiológico, pois pode auxiliar na identificação dos animais possivelmente envolvidos na manutenção de ciclos enzoóticos de agentes etiológicos de doenças. Oferece, portanto,subsídios para a indicação de potenciais reservatórios desses agentes, assim como o papel protetor que certos animais poderiam desempenhar em relação ao homem em área de transmissão dos mesmos. Dentro os métodos empregados para avaliar o grau de atração exercido por certas fontes de alimento em relação aos vetores e, conseqüentemente, detectar possíveis reservatórios de parasitas transmitidos por tais artrópodos, os sorológicos se destacam. O objetivo deste estudo consistiu-se em padronizar a técnica imunoenzimática (ELISA) de captura adotada por Chow et al. 1993 para mosquitos do gênero Aedes e empregá-la na identificação de sangue ingerido por flebotomíneos, visando a sua implantação em Laboratório de Saúde Pública, para estudos de hábito alimentar destes insetos, em áreas de transmissão de leishmaniose. O teste foi padronizado para a identificação de sangue de fonte: humana, ave, suíno, cão e rato. Para a identificação da reatividade, segundo o tempo de digestão do sangue ingerido, foram utilizadas fêmeas ingurgitadas de flebotomíneos da espécie Nyssomyia intermédia criadas em laboratório, alimentadas com sangue humano e mortas em intervalos de 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24 e 36 horas pós-repasto. Posteriormente, 232 fêmeas, ingurgitadas ou não, de flebotomíneos silvestres foram testadas. Foi detectado sangue ingerido no abdômen das fêmeas até 36 horas pós-repasto. Das amostras de fêmeas silvestres, 23,3 por cento foram reagentes a algum tipo das fontes especificadas: 13,8 por cento para ave (13,8 por cento), humano (5,17 por cento), suíno (4,3 por cento), rato (2,2 por cento) e cão (1,7 por cento). Repasto misto (rato e humano) foi detectado em 1,7 por cento das amostras. A técnica ELISA indireta de captur...

Expressão diferencial de genes que codificam peptídeos antimicrobianos de aedes aegypti em resposta à infecção por Wuchereria bancrofti / Differential expression of antimicrobial peptides genes of Aedes aegypti in response to Wuchereria bancrofti infection

No Brasil, a filariose linfática causada por Wuchereria bancrofti ainda é um grave problema de saúde pública. O mosquito Culex quinquefasciatus é o principal vetor nas áreas onde este nematódeo tem periodicidade noturna, enquanto Aedes aegypti é uma espécie naturalmente refratária. Os mecanismos responsáveis pela refratariedade a W. bancrofti nesta espécie de mosquito são desconhecidos. Desse modo, estudos sobre a resposta imune de Ae. aegypti à W. bancrofti são importantes para compreender os mecanismos que limitam o desenvolvimento deste patógeno nesta espécie de mosquito. O objetivo deste trabalho foi avaliar o padrão de expressão temporal dos genes defensina, cecropina e transferrina de Ae. aegypti infectados artificialmente com W. bancrofti, assim como observar o desenvolvimento do filarídeo neste mosquito comparado com Cx. quinquefasciatus. Fêmeas de Ae. aegypti Rec Lab e Cx. quinquefasciatus CqSF foram alimentadas artificialmente com amostras de sangue venoso de voluntários infectados e não infectados com W. bancrofti. Após o repasto sanguíneo, foi extraído o RNA total de pools Ae. aegypti - tanto do grupo controle, quanto do grupo infectado, coletados nos seguintes tempos: 2h, 24h, 48h, 72h e 7 dias. Os RNAs foram submetidos a reações de RT-PCR em tempo real com primers específicos para os genes da defensina, cecropina, transferrina e rpL8 (controle endógeno), separadamente e em duplicata. A expressão relativa destes genes foi calculada pelo método 2- C T. Nas observações microscópicas, a cabeça, tórax e abdômen de mosquitos Ae. aegypti e Cx. Quinquefasciatus foram dissecados durante os 15 dias pós-infecção, a fim de avaliar a migração, o desenvolvimento e o movimento dos parasitas. Os resultados mostraram que a transcrição da defensina, cecropina e transferrina aumentou em Ae. aegypti logo após a infecção com W. bancrofti, apresentou picos às 2h (cecropina) ou 24h (defensina e transferrina), e diminuiu a partir de 48h. Os picos de transcritos imunes coincidiram com o período de migração da microfilária para o tórax de Ae. aegypti, que ocorreu nas primeiras 24h. Após a migração, vermes filarídeos diferenciaram-se em larvas de primeiro estádio salsichóide, mas interromperam o desenvolvimento a partir desse momento, diferentemente de Cx. quinquefasciatus, cujo desenvolvimento de W. bancrofti foi normal. É possível que defensina, cecropina e transferrina estejam envolvidas na resposta imune de Ae. aegypti à infecção por W. bancrofti.

Monitoramento do gene, que codifica a esterase, envolvido na resistência a inseticidas organofosforados em populações naturais de Aedes aegypti do Brasil / Monitoring of the esterase encoding gene, involved in the resistance to organophosphate insectices in natural populations of Aedes aegypti in Brazil

O objetivo principal deste trabalho foi analisar o polimorfismo genético do gene da esterase e, avaliar o seu papel em possíveis mecanismos de resistência ao temephos em populações de Aedes aegypti. Com este propósito, foram utilizadas duas linhagens de laboratório: a Rockefeller (padrão de susceptibilidade a todas as classes de inseticidas) e a Recife-Resistente (mantida sob forte pressão de seleção pelo temephos durante cinco gerações); e nove populações naturais: oito provenientes da região metropolitana do Recife e uma de Araripe (CE). Elas foram coletadas em forma de ovos, durante os anos de 2004 e 2005. Foram realizados ensaios bioquímicos, eletroforese de isoenzimas, PCR e seqüenciamento de parte do gene, e PCR em Tempo Real para comparar a quantidade de cópias do gene na linhagem resistente e susceptível, e em populações naturais. Testes bioquímicos realizados apenas na linhagem Recife-Resistente demonstraram a presença do mecanismo de resistência metabólica através de uma alta atividade esterásica. O padrão das esterases foi observado em nove populações, em géis de poliacrilamida 6 por cento, corados com substratos específicos para as enzimas alfa e beta-esterase. Os valores de heterozigosidade observada (Ho) variaram de 0,278 a 0,533 em 2004, e em 2005, de 0,388 a 0,608. Estes géis ainda apresentaram um loco de alta atividade esterásica, denominado de loco 1. Neste loco, o alelo responsável pela maior atividade esterásica foi chamado de 3. Sua freqüência variou em 2004 de 0,100 em Dois Irmãos a 0,191 em Alto José do Pinho, e em 2005, caiu para 0,071 e 0,107 respectivamente. Na linhagem Recife-Resistente, a freqüência deste alelo foi de 0,214. O seqüenciamento de parte do exon 4 do gene da alfa-esterase, mostrou que o fragmento analisado, de aproximadamente 180 pb, é relativamente conservado, apresentando somente quatro sítios polimórficos em seis populações estudadas. Os resultados da PCR em Tempo Real indicaram que as populações estudadas não apresentam amplificação gênica para o gene da alfa-esterase, quando comparadas à linhagem Rockefeller, com exceção das populações de Engenho do Meio e Araripe. [...] estes resultados ainda precisam de maiores comprovações a fim de se assegurar que a superexpressão dos genes é a possível causa da resistência. A freqüência do alelo superexpresso pode ser monitorada ao longo do tempo e auxiliar no manejo da resistência ao inseticida químico em populações tratadas.

Isolation and serotyping of dengue viruses by mosquito inoculation technique from clinically suspected cases of dengue fever.

Dengue virus was isolated from 44 clinically suspected cases of dengue fever by mosquito inoculation technique using Aedes aegypti mosquito in the department of virology, BSMMU in the year 2000. Identification of dengue virus was done by direct fluorescent antibody technique using FITC conjugated anti-dengue monoclonal antibody and serotyping was carried out by indirect fluorescent antibody technique using serotype specific monoclonal anti-dengue antibody. The dengue virus isolation rate was 41.9%. The result of serotyping revealed circulation of all four serotypes of dengue viruses in Dhaka, Bangladesh and DEN-3 was the predominant (70.5%) serotype during the outbreak in 2000. The rate of isolation was higher in patient's serum at an early stage of fever (p<0.01) and with higher body temperature (p<0.01). The rate of isolation was 77.77% in patient's serum collected on the 1st day of fever, and then the rate gradually declined and lowest (16.6%) on the 5th day of fever. The mosquito inoculation technique is an easy, economical and sensitive method for dengue virus isolation and is recommended for routine virological surveillance in laboratories of Bangladesh where sophisticated facilities are limited.

Development of monoclonal antibody based antigen capture ELISA to detect chikungunya virus antigen in mosquitoes.

BACKGROUND & OBJECTIVES: Chikungunya (CHIK) virus has caused numerous large outbreaks in India. No active or passive surveillance has been carried out since the last epidemic which occurred in 1971. For active surveillance, it is necessary to have a test, which can detect the virus from a large number of field-collected mosquitoes. METHODS: The present study describes the standardization of monoclonal antibody (MAb) based antigen capture ELISA to detect chikungunya virus antigen from the mosquitoes. CHIK virus antigen from suspension of experimentally infected mosquitoes and their progeny was captured on mouse polyclonal antibody, while biotinylated CHIK Mab was used as a probing antibody. CHIK virus antigen in the head squashes of virus inoculated mosquitoes was detected using indirect immunofluorescence antibody (IFA) test for confirmation of ELISA results. RESULTS: The ELISA test was sensitive enough to detect antigen even if a small fraction of a single infected mosquito homogenate was incorporated in the test. The IFA test failed to detect CHIK antigen in 10 and 25 microliters of suspension whereas with ELISA it was detected in all the samples. Progeny of Aedes aegypti and Ae. albopictus mosquitoes infected with chikungunya virus did not show the possibility of existence of transovarial transmission. INTERPRETATION & CONCLUSION: This test is rapid and simple since it can be completed in two days as compared to the conventional mosquito inoculation and IFA techniques, which require at least 10 days. There is an additional advantage with this test that a large number of samples can be processed, and the remaining homogenate of the mosquitoes can be used for screening other viruses. Experimental data raised using this test showed that transovarial transmission of this virus does not occur in these vector species.

Mesocyclops thermocyclopoides y el control biológico de Aedes: ejemplo de un plan de acción comunitaria en Chacarita, Puntarenas / Mesocyclops thermocyclopoides and the biological control of Aedes

El control del dengue debe orientarse hacia el control del mosquito vector. Se reclutó un grupo de 15 niños de la Escuela Veinte de Noviembre, Chacarita, Puntarenas, a quienes de les enseñó a cultivar el copépodo Mesocyclops thermocyclopoides, su aplicación y la necesidad de eliminar criaderos de Aedes. Además, se realizó un experimento de campo en el cementerio de Puntarenas, inoculando copépodos, los niños lograron mantenerlo viable durante un mínimo de 7 meses, en ese lapso rociaron los copépodos en posibles criaderos no eliminables. Por otra parte, en cuanto al experimento de campo, al cabo de dos meses se recuperaron los copépodos de tres de los doce floreros inoculados, el resto de los floreros habían sido vaciados o se habían secado. En esos tres floreros con copépodos no se encotraron larvas de Aedes; en tanto que en cinco floreros cercanos, que durante el periodo de observación se llenaron de agua, presentaban en promedio 100 larvas. Estos datos demuestran que es posible realizar campañas para el control de Aedes involucrando a la comunidad e incluyendo el control biológico como una arma más contra el mosquito (Rev Cost Cienc Méd 1999; 20(1,2): 45-50) Palabras clave: Aedes, Mesocyclops, dengue, control biológico

Studies on the susceptibility of a large urban population of Aedes aegypti to infection with dengue viruses.

A large urban population of Aedes aegypti in Jakarta, Indonesia was studied for one year to determine whether it was homogeneous in terms of susceptibility to dengue viruses and whether seasonal changes in susceptibility to dengue viruses occurred. Mosquitoes from several districts in Jakarta showed a low but homogeneous susceptibility to dengue 2 virus from November 1975 to April 1976. In June 1976, increased susceptibility to dengue 2 virus was observed among some of the subpopulations of Ae. aegypti, and higher infection rates and increased variation were observed among these mosquitoes during the rest of the study period. Correlation with confirmed DHF cases in Jakarta was discussed.